RealPAGE Native BN/CN 預(yù)制膠(U型板，通用型，12孔)
RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)
● 貨品規(guī)格：
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貨號
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名稱
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分離范圍
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規(guī)格
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保存
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RTD6138-0312
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3-12% RealPAGE Native BN/CN 預(yù)制膠
(U型板，通用型，12 孔)
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30-10000 kD
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10板
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4℃
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RTD6138-0416
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4-16% RealPAGE Native BN/CN 預(yù)制膠
(U型板，通用型，12 孔)
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15-1000 kD
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10板
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4℃
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● 產(chǎn)品簡介：
Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從生物樣品（質(zhì)膜，胞漿等）中分離分子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋白質(zhì)復(fù)合物的電泳技術(shù)。其原理是用溫和去污劑(如 DDM，digitonin)將蛋白復(fù)合體從細(xì)胞膜中以近似天然的狀態(tài)分離出來，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍(lán) G-250 代替 SDS與蛋白結(jié)合而使其帶負(fù)電荷，根據(jù)蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖液中不加入任何染料，電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態(tài)，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考馬斯亮藍(lán)G-250存在，使蛋白都覆蓋上負(fù)電荷，可以分離堿性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只適合于酸性蛋白（pI＜7）的分離。
本產(chǎn)品可以用于分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白復(fù)合體，樣品可以來于胞漿、細(xì)胞總裂解液、細(xì)胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實驗，也可直接用于電洗脫制備蛋白。
● 運(yùn)輸和貯存：
本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷凍；有效期12個月。
● 使用說明：
1. 樣品制備：
該產(chǎn)品不含樣品制備的相關(guān)試劑，根據(jù)樣品種類選擇不同提取方法。植物類囊體BN樣品制備可以選擇植物類囊體膜提取試劑盒（貨號:RTU5002）；動物總蛋白BN樣品制備可以選擇
動物胞漿活性蛋白提取試劑盒(貨號:RTD8106)；動物膜蛋白BN樣品制備可以選擇動物膜蛋白提取試劑盒（貨號:RTD8111,RTD8112）；動物線粒體BN樣品制備可以選擇動物線粒體提取試劑盒（貨號:RTD8115和RTD8116)。
2. 電泳：
2.1 拆開預(yù)制膠包裝，將預(yù)制膠安裝在合適的電泳槽中。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（下圖）。
六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。
不兼容Thermol系列電泳槽。
2.2 準(zhǔn)備電泳緩沖液：
將10×BN/CN PAGE電泳緩沖液（干粉）溶于500 ml滅菌水中，徹底溶解，測定pH應(yīng)為7.0左右，不要調(diào)節(jié)pH。用前稀釋10倍即配成1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。
2.2.1 CN-PAGE電泳：
陽極緩沖液和陰極緩沖液均直接使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液進(jìn)行電泳。
2.2.2 BN-PAGE電泳：
陽極緩沖液使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液，陰極緩沖液按照下表配制：
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1×藍(lán)色陰極緩沖液
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150 ml
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10×BN/CN PAGE電泳緩沖液
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15 ml
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2% G-250 染料（電泳用）
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1.5 ml
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超純水
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定容至150 ml
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2.3準(zhǔn)備樣品：
2.3.1 CN-PAGE電泳：
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總體積
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10 μl
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蛋白樣品
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液
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2.5 μl
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超純水
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補(bǔ)至10 μl
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不要加熱
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2.3.2 BN-PAGE電泳：
2.3.2.1 植物類囊體膜蛋白電泳：
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總體積
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10 μl
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含去垢劑樣品*
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植物類囊體膜蛋白樣品
（2%DDM增溶）
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液
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2.5 μl
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5% G-250染料（蛋白上樣）
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1 μl
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超純水
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補(bǔ)至10 μl
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不要加熱
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*植物類囊體膜蛋白電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：
植物類囊體樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。例如樣品中DDM（n-Dodecyl β-D-maltoside，β-DM， n-十二烷基-β-D-麥芽糖苷）終濃度為2%，則需要G-250終濃度為0.5%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料1 μl。
2.3.2.2 動物線粒體BN樣品電泳：
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總體積
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10 μl
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含去垢劑樣品*
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動物線粒體BN樣品
（1%DDM增溶）
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x μl
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4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液
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2.5 μl
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5% G-250染料（蛋白上樣）
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0.25 μl
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超純水
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補(bǔ)至10 μl
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不要加熱
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*動物線粒體BN樣品電泳中，含去垢劑樣品中染料加入按照以下原則：
動物線粒體BN樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/8。例如樣品中DDM終濃度為1%，則需要G-250終濃度為0.125%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.25 μl。
2.4電泳過程；
2.4.1 CN-PAGE電泳：
電泳內(nèi)外槽均使用1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×BN/CN PAGE電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕撥出預(yù)制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN PAGE電泳緩沖液。
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CN-PAGE電泳
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恒電壓
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起始電流
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結(jié)束電流
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電泳時間
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120V
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10-15mA/板膠
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4-10mA/板膠
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50+min
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注：冰浴電泳
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2.4.2 BN-PAGE電泳：
BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內(nèi)槽開始電泳使用的是1×藍(lán)色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達(dá)凝膠1/3處時，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續(xù)后續(xù)電泳，因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續(xù)的轉(zhuǎn)膜實驗。
BN-PAGE電泳條件（一板膠）
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恒電壓
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起始電流
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電泳時間
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緩沖液
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120 V
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8-15 mA
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20-25 min
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1×藍(lán)色陰極緩沖液
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冰浴電泳
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指示前沿至凝膠頂部三分之二處，更換內(nèi)槽緩沖液為1×BN/CN 電泳緩沖液
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恒電壓
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繼續(xù)電泳時間
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結(jié)束電流
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緩沖液
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120 V
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45 min +
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3-5 mA
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1×BN/CN電泳緩沖液
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冰浴電泳
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3. 轉(zhuǎn)膜：
BN-PAGE轉(zhuǎn)膜必須用PVDF膜，不能用NC膜，因為NC膜與G-250結(jié)合非常緊密，不易去除。轉(zhuǎn)膜后PVDF膜上的藍(lán)色染料可以用無水甲醇漂洗去除。轉(zhuǎn)膜緩沖液推薦使用10×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液（貨號：BC600P）。
4. 染色：
4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量FastBlue蛋白染色液或常規(guī)考馬斯亮藍(lán)染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），條帶1-2分鐘即可見。
4.2 搖床常溫?fù)u動10-15分鐘至條帶清晰可見。
4.3 加入適量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫?fù)u動10-15分鐘至背景干凈。
4.4 觀察保存結(jié)果。
5. 實驗示例：
BN-PAGE 3-12% Precast Gel
穩(wěn)壓120V 1.5 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳
BN-PAGE 4-16% Precast Gel
恒壓 120V 2 h 1×BN/CN電泳緩沖液 冰浴電泳
Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(RTD6139/RTD6138)
使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [2021 IF=10.15] SlRIP1b
is a global organellar RNA editing factor, required for normal fruit
development in tomato plants
Author: Jinyan Li, Keru
Wang, Yongfang Yang, Yao Lu, Kaicheng Cui, Yajing Ji, Liqun Ma, Ke Cheng, Oren
Ostersetzer-Biran, Feng Li, Guiqin Qu, Benzhong Zhu, Daqi Fu, Yunbo Luo,
Hongliang Zhu
Journal: New
Phytologist 2023，Volume237, Issue4，F(xiàn)ebruary 2023，Pages 1188-1203
Institution： China Agricultural University
Paper link：https://doi.org/10.1111/nph.18594
2.
[2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1,
functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella
Author: Xinyan Geng,Huijuan Jin,
Lan Xia.Binbin Wang,Suren Chen
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024)
81:118
Institution: Beijing
Normal University
Paper link：https://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3
3.
[2022 IF2.6] What are the main proteins in the hemolymph
of Haemaphysalis flava ticks?
Author: Dan Li , Lei Liu , Zi-ling Liu
, Yuan Tian , Xin Gao，Tian-yin Cheng
Journal: Frontiers in Veterinary Science Published 17
July 2024
Institution: Hunan
Agricultural University
Paper link： https://doi.org/10.3389/fvets.2024.1387719