彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker III（1.5-45 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker III（1.5-45 kD）
●產(chǎn)品編號及規(guī)格：
RTD6147 10 T（50 μl）
● 儲存、運輸及效期：
-20℃保存，濕冰運輸，有效期1年。
● 產(chǎn)品簡介：
彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker III可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由7種多肽和蛋白質(zhì)組成，分子量大小為 1.5 kD，4 kD（紅色），8 kD， 15 kD（綠色），20 kD， 30 kD，45 kD (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標(biāo)定過。)
● 使用說明：
第一次收到該產(chǎn)品，常溫融化后，徹底混勻，離心快甩將溶液完全收集到管底。
一. 制膠：
說明：可以根據(jù)以下步驟自己制備凝膠。也可以選擇Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號：RTD6122）進行實驗。
1.1 配制分離膠
1.1.1 按照表1將組份加入到小燒杯中混合。
1.1.2加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
1.1.3 在玻璃板中迅速灌入適量分離膠溶液，使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長0.5 cm即可（注：此溶液為過量，請勿全部注入）。然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇，使凝膠表面保持平整。
1.1.4 靜置15-30分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
注：凝膠的聚合時間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長?？梢愿鶕?jù)表1的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。分離膠25℃條件下，約20分鐘可以聚合。
表1 （一塊1 mm mini膠用量）
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分離膠
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濃縮膠
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18％T,
5%C /5 ml
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5％T,
3.3%C/2 ml
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40%
PAA（19:1）
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2.25
ml
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/
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40%
PAA (29:1)
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/
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0.25
ml
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4×凝膠緩沖液
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1.25
ml
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0.5
ml
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乙二醇（電泳級）
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1.5
ml
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/
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ddH2O
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/
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1.25ml
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10％APS
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50
μl
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20
μl
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TEMED
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5
μl
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2
μl
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1.2 配制濃縮膠
1.2.1 去除覆蓋在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留乙醇吸去。
1.2.2 按照表1將各組份加入到小燒杯中混合。
1.2.3 加入10%過硫酸銨和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
1.2.4 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
1.2.5 靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合
注：凝膠的聚合時間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長?？梢愿鶕?jù)表1的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件下，約40分鐘可以聚合。
二. 電泳：
2.1 取Marker樣品，充分混勻后備用。不要加熱處理。
2.2 電泳前，將10×陽極緩沖液（Cat
No：AB080）和10×陰極緩沖液（Cat
No：CB010）用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液，內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過2×Tricine上樣緩沖液[Cat
No：TP050]處理）加入點樣孔，參考下表進行電泳，至每條帶都清晰可見時停止電泳。整個電泳過程大約需要2-3個小時。
表2 多肽電泳條件
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恒電壓
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150V
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起始電流
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60-75mA/板膠
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結(jié)束電流
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15-25mA/板膠
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電泳時間
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2-3小時
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三. 染色
根據(jù)常規(guī)實驗步驟，用配方6和7（表3）進行染色和觀察。如果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），該產(chǎn)品除具有染色快，無毒，靈敏性高等特點外，還能對小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規(guī)染色液的理想替代品。
表3 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制
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1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮膠）
貨號： AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉雙丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，過濾后使用。
貯存：4℃
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2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠）
貨號：AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲叉雙丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，過濾后使用。
貯存：4℃
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3. 4×凝膠緩沖液（配制凝膠用）
貨號：GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10％ SDS
用HCl調(diào)pH值至8.45；用ddH2O定容至100
ml
貯存：4℃
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4. 10×陽極緩沖液（下槽緩沖液）
貨號：AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g；ddH2O 400ml；用HCl調(diào)pH值至8.9；用ddH2O定容至500ml
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陽極緩沖液使用。
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5. 10×陰極緩沖液（上槽緩沖液）
貨號：CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g；Tricine 179.2g；SDS
10 g
用ddH2O溶解，定容至1000
ml(不用調(diào)pH)。
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用
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6. 染色液
貨號：RTD6203
冰醋酸 100 ml
考馬斯亮藍G-250 0.25 g
水 900 ml
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7. 脫色液
貨號：RTD6204
冰醋酸 100 ml
水 900 ml
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8. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液（10ml）
貨號：TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4
ml 甘油；0.8 g SDS；0.31
g DTT（或者400 μl β-巰基乙醇）；2
mg 考馬斯亮藍G-250；用滅菌水定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?/span>
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