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10×RealBlot 快速轉(zhuǎn)膜液

                 10×RealBlot Rapid Transfer buffer            

● 產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

快速轉(zhuǎn)膜液使用獨(dú)特配方，能高效快速地將蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜（PVDF或硝纖膜）上。使用濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）或半干轉(zhuǎn)法（Semi-dry blot）方法，能在10-40分鐘內(nèi)完成轉(zhuǎn)膜過程。

快速和環(huán)保：快速轉(zhuǎn)膜液不使用甲醇，減輕了對(duì)實(shí)驗(yàn)者和環(huán)境的傷害。

兼容性好：快速轉(zhuǎn)膜液能兼容Laemmli膠，預(yù)制膠，Bis-Tris膠等多種凝膠。

轉(zhuǎn)移效率高：快速轉(zhuǎn)膜液對(duì)分子量跨度較大的蛋白也有很好的轉(zhuǎn)移效率，有效解決了大小蛋白不能在同一張膜上同時(shí)轉(zhuǎn)移的問題。

● 貯存及運(yùn)輸：

  4-8℃貯存，有效期一年；常溫運(yùn)輸。

● 使用說明：

轉(zhuǎn)膜前的準(zhǔn)備：

6-10張裁好的普通濾紙或Whatman3MM濾紙；裁好的轉(zhuǎn)印膜；足夠的1×快速轉(zhuǎn)移buffer；無水甲醇（處理PVDF膜用）

一 濕轉(zhuǎn)法（Tank blot）：

1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液

2 將濾紙和海綿浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤(rùn)濕30秒，隨后浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘；NC膜無需處理，直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。

4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。

注意：水中漂洗時(shí)間一定不能超過2分鐘，否則分子量較大的蛋白不能完全轉(zhuǎn)移。

5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu)：

1 負(fù)極（陰極）

2 一塊海綿

3 濾紙（3張）

4 凝膠

5 轉(zhuǎn)印膜

6濾紙（3張）

7 一塊海綿（根據(jù)三明治的厚度選擇是否使用）

8 正極（陽極）

注意：  ① 要徹底清除三明治結(jié)構(gòu)中的氣泡，適當(dāng)補(bǔ)加1×快速轉(zhuǎn)膜液保持三明治結(jié)構(gòu)濕潤(rùn)。

 ② 三明治結(jié)構(gòu)的制作不能太緊，也不能太松。太緊和太松都會(huì)影響轉(zhuǎn)印效果。如果太緊的話，可以去除陽極一側(cè)的海綿。

6 將三明治結(jié)構(gòu)放于轉(zhuǎn)移槽中，轉(zhuǎn)印槽中灌滿1×快速轉(zhuǎn)膜液。

7 濕轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移：

二 半干轉(zhuǎn)（Semi-dry blot）：

1 按照下表配制1×快速轉(zhuǎn)膜液：

2 將濾紙浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕。

3 PVDF膜使用前要用無水甲醇潤(rùn)濕30秒，浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中，完全浸濕，平衡5分鐘。NC膜無需處理，直接浸泡在轉(zhuǎn)膜緩沖液中。

4 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS；隨后將凝膠浸泡在1×快速轉(zhuǎn)膜液中。

注意：水中漂洗時(shí)間不能超過2分鐘，否則分子量較大的蛋白可能不能完全轉(zhuǎn)移。

5 按照以下順序做好轉(zhuǎn)印三明治結(jié)構(gòu)：

1 負(fù)極（陰極）

2 下層濾紙（5張）

3 凝膠

4 轉(zhuǎn)印膜

5 上層濾紙（5張）

6 正極（陽極）

半干轉(zhuǎn)時(shí)，濾紙、膠、膜之間的大小，一般是下層濾紙>=膜>=膠>=上層濾紙。上下兩層的濾紙一定不能接觸；濾紙、膠、膜之間千萬不能有氣泡，接觸的濾紙和氣泡會(huì)造成短路。

6 半干轉(zhuǎn)推薦使用恒流轉(zhuǎn)移：

注：不同廠家半干轉(zhuǎn)儀器設(shè)置可能有所不同，請(qǐng)根據(jù)廠家說明書適當(dāng)調(diào)整。

三 問題解決：

 實(shí)驗(yàn)示例：