DAPI染色液（DAPI
Stain Solution,10 μg/ml）
● 產(chǎn)品組成：
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組分貨號
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名稱
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規(guī)格
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貯存
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DA1023S
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DAPI染色溶液
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10
ml
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-20℃
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡介：
DAPI染色液(DAPI Staining Solution)是適用于常見細(xì)胞和組織細(xì)胞核染色的染色液。 DAPI即 2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine
dihydrochloride，也稱DAPI dihydrochloride，分子式為C16H15N5?
2HCl ，MW為350.25，CAS Number 28718-90-3。
DAPI是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍，DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。 DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。 DAPI的最大激發(fā)波長為340nm，最大發(fā)射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長為364nm，最大發(fā)射波長為454nm。 DAPI的發(fā)射光為藍(lán)色，且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長僅有少部分重疊，可以利用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧?/span>
本DAPI染色液為即用型，濃度為10μg/ml，可以直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。
● 貯存：
-20℃避光保存，一年有效。
● 操作步驟：
一 懸浮細(xì)胞染色
1.1 500 g（2400
rpm，下同）離心收集細(xì)胞樣品于1.5 ml離心管內(nèi)，加入0.5
ml固定液（貨號：KA5010，卡諾固定液），緩緩懸起細(xì)胞，常溫固定10分鐘或更長時(shí)間(可4℃過夜)。
1.2離心去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鐘，洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
1.3 細(xì)胞沉淀中加入200
μl DAPI染色液，重懸細(xì)胞，37℃避光染色10-15分鐘，手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
1.4 離心收集沉淀，重懸于100 μl 1×PBS中。
1.5 取5 μl抗熒光淬滅封片液（貨號：AM0510）于載玻片上，加入等體積步驟1.4染色后細(xì)胞重懸液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
1.6 熒光顯微鏡下紫外激發(fā)觀察可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。
注：熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測。
二 貼壁細(xì)胞染色
2.1 取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時(shí)間，無菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用無菌的PBS洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過夜，生長至50%-80%滿度。
2.2刺激細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5
ml固定液，固定10分鐘或更長時(shí)間(可4℃過夜)。
2.3去盡固定液，用PBS洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)晃動(dòng)。
2.4加入0.5
ml DAPI染色液，37℃避光染色10-15分鐘，手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
2.5去盡染色液，用PBS洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床或手動(dòng)晃動(dòng)。
2.6滴一滴抗熒光淬滅封片液（貨號：AM0510）于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，讓細(xì)胞接觸封片液，盡量避免氣泡。
2.7熒光顯微鏡下紫外激發(fā)觀察可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。
注：熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測
實(shí)驗(yàn)示例：
操作流程：使用不同濃度星飽菌素（Staurosporine，STS）凋亡處理Jurkat細(xì)胞。調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/ml，每孔2
ml接種于六孔板中；加入終濃度為0，0.1，0.5，1 μM STS，37℃ 5%CO2培養(yǎng)3小時(shí)；500 g 3 min收集細(xì)胞；細(xì)胞沉淀中加入1 ml固定液，常溫固定10 min；1×PBS漂洗兩次；細(xì)胞沉淀中加入0.5 ml DAPI染色液，37℃避光染色10 min；離心后細(xì)胞沉淀重懸于100 μl 1×PBS中；取5 μl細(xì)胞懸液滴于載玻片上，加5 μl 抗熒光淬滅劑，封片觀察。
凋亡細(xì)胞由于染色質(zhì)固縮，細(xì)胞核呈致密濃染或碎塊狀致密濃染。細(xì)胞凋亡過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)變化分三期：I期的細(xì)胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased）（0.1 μM STS處理），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)（0.5 μM STS處理）。II a期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚，邊緣化；II b期的細(xì)胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體（1 μM STS處理）。
使用DAPI染色一發(fā)表部分文章列表
1. [2022 IF=4.9] The Transcription Factor MiMYB8 Suppresses
Peel Coloration in Postharvest ‘Guifei’ Mango in Response to High Concentration
of Exogenous Ethylene by Negatively Modulating MiPAL1.
Author: Muhammad Muzammal Aslam, Mingrui Kou ,
Yaqi Dou, Shicheng Zou, Rui Li, Wen Li, Yuanzhi Shao.
Journal: International Journal of Molecular
Sciences 2024, 25, 4841.
Institution： Sanya Nanfan Research Institute,
Hainan University
Paper link：https://doi.org/10.3390/ijms25094841